熱敏UDG/UNG——高效去除擴增產物氣溶膠污染

　　在核酸檢測、司法鑒定、食品檢測等分子診斷實驗室中，經常使用PCR或環介導等溫擴增 (LAMP) 等技術大量擴增同類樣品，由擴增產物散逸形成的氣溶膠所導致的PCR假陽性問題帶來很大困擾。使用尿嘧啶-DNA糖基化酶 (Uracil-DNA Glycocasylase) 去除擴增產物氣溶膠污染是目前較為安全和有效的方法。

UDG作用原理

　　在DNA擴增反應底物dNTPs中摻入dUTP，擴增的DNA產物中即含有dU。如果反應體系被含有dU的外來擴增產物氣溶膠污染，在擴增反應之前，UDG可在常溫下催化水解外來DNA鏈中的尿嘧啶堿基和脫氧核糖骨架之間的N-糖苷鍵，產生缺堿基 (AP) 位點，然后將UDG失活。在隨后擴增反應的高溫下，含有AP位點的DNA骨架水解斷裂，從而降解了外來擴增產物。而本次新加入的反應模板不含dU，不受UDG影響。

愚公百時美——熱敏UDG

性能展示：

圖1  HL-UDG 在50℃下徹底不可逆失活。A：將1 U的HL-UDG分別在50℃、70℃、95℃條件下孵育10min后與含dU底物25℃下反應。消化的底物電泳條帶無明顯變化。B：該酶50℃ 下5min、10min失活后的熒光值均與不加UDG的熒光值接近。

 2、 保持PCR產物的完整性  

圖2  HL-UDG不影響PCR產物的完整性。A：在PCR體系中加HL-UDG，在37℃下孵育0、1、2、4、6、8h，凝膠電泳結果顯示加或不加HL-UDG，PCR產物條帶無明顯變化。B：在PCR體系中加HL-UDG，37℃下孵育8h的PCR產物測序結果顯示序列完整。

3、 兼容qPCR體系&消化徹底  

圖3  HL-UDG兼容qPCR體系&消化徹底。A：在模板為不含有dUTP的qPCR體系加入HL-UDG 與不加入的擴增效果一致。B：qPCR體系中加入不同濃度的含dU模板均被徹底消化，不起峰。

1、 控制PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、LAMP中的擴增產物氣溶膠污染。

2、DNA 修復和突變檢測研究。

3、提升 PCR 產物的克隆效率。

4、提升定點突變的效率。

5、蛋白-DNA 相互作用研究。