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干貨分享 | 你購買的Taq酶抗體好用么?

發布時間:2024-03-13 發布人:
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       眾所周知,利用Taq酶抗體實現熱啟動PCR是抑制非特異性擴增的重要手段。Taq酶抗體在低溫下(一般<50℃)能夠封閉Taq酶的活性,而在PCR反應溫度下與Taq酶解離并釋放其活性,從而避免低溫時產生的非特異性擴增。
       現有熒光定量PCR試劑中,Taq酶抗體的成本占到總成本的60%以上。但是小伙伴們是否發現,從市場上購買的Taq酶抗體往往對自己的Taq酶封閉效果并不理想,這是什么原因呢?
       免疫學上,抗原上與抗體結合的位點稱為抗原表位,往往只包含幾個氨基酸殘基。如果所使用的Taq酶是突變體,而突變位點恰好位于某個抗原表位上,那么針對野生型Taq酶篩選的抗體與這種突變體的親和力就有可能下降。
       針對這種問題,愚公生物&百時美研發團隊經過長期努力,成功構建了包含多種Taq酶抗體的抗體庫。與常規抗體庫相比,愚公抗體庫有三點顯著優勢:
       1. 可針對不同Taq酶突變體進行封閉,組合使用可達到更優效果;
       2. 包含針對外切酶結構域的抗體;
       3. 純度高,批間一致性好。

 

一、可封閉不同Taq酶突變體,組合使用效果更佳

       實際應用中,已經出現了針對不同需求(如提高擴增速率、增強抑制劑耐受性等)的多種Taq酶突變體。愚公選取了公開發表文獻中的6種Taq酶突變體進行測試,發現不同抗體對不同Taq酶突變體的親和力有顯著差異。
       因此,愚公生物&百時美構建了包含多種抗體的抗體庫,以滿足用戶對不同Taq酶突變體的需求。
       我們在野生型Taq酶上發現了至少5個抗原表位,不同抗體對同一種Taq酶的結合表位也不盡相同。利用該性質,組合使用不同抗體可達到最大的封閉效果。
       針對野生型Taq酶,分別使用A3、A7、A3/A7混合抗體按照摩爾比抗體:Taq=2:1孵育得到熱啟動Taq酶,并測試其活性,結果如下圖:

       熒光值越高表示Taq酶殘留活性越高。結果顯示40 U的熱啟動Taq酶活性<0.2 U Taq,代表40 U Taq酶被封閉了超過39.8 U的活性,則封閉性>39.8/40=99.5%。

       在抗體與Taq酶摩爾比不變的情況下,使用A3/A7混合抗體對Taq酶的封閉效率遠大于單獨的A3或A7抗體,在37℃下幾乎完全封閉了Taq酶活性。

       愚公生物&百時美Taq酶抗體在正常PCR的95℃,30 s預變性過程中即可充分解封閉,且升溫過程中無非特異性擴增,無需額外改變反應程序。

 

二、可封閉外切酶活性的抗體

       Taq酶除具有DNA聚合酶結構域外,還具有5’-3’外切酶結構域。在Taqman探針法檢測中。如果僅封閉聚合酶結構域,外切酶結構域仍可能降解一部分探針,產生假陽性結果。

       我們經過潛心篩選,獲得了能夠高效封閉Taq酶外切酶活性的單克隆抗體,測試結果如下:
       該抗體對Taq外切酶活性封閉率>95%。

 

三、生產工藝先進,質量穩定可靠

? 純度高

經SEC-HPLC檢測,抗體純度>99%

? 無污染

愚公生物&百時美還確保抗體無核酸酶殘留、無內毒素、無宿主核酸。

內毒素:<1 EU/mg  
宿主DNA:<1 copy/μg
? 穩定性高
將抗體在37℃下存放不同時間后,再與Taq酶混合后進行qPCR,結果均無顯著性差異。
?批間一致性好
3個批次的Taq antibody,與Taq酶孵育后檢測,封閉比例均>99.5%,結果無顯著差異。

 

四、相關產品

愚公生物&百時美可以根據客戶提供的Taq酶突變體,定制篩選最合適的抗體。
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